The enumeration of bacteria and CRB in wastewater and sludge samples is shown in Supplementary Table S2. The colony-forming unit (CFU) of general heterotrophic bacteria, E. coli, and non-E. coli other bacteria enumerated in wastewater and sludge samples ranged from 1.4 × 105 ± 3.2 × 104 to 1.9 × 106 ± 3.3 × 105CFU/mL and 3.3 × 104 ± 1.1 × 104 to 1.4 × 106 ± 1.9 × 105CFU/g, respectively. On the other hand, carbapenem-resistant heterotrophic bacteria detected in wastewater and sludge samples were 1.0 × 104 ± 3.8 × 103 CFU/mL and 3.7 × 104 ± 1.1 × 104CFU/g, respectively. On mTEC agar, carbapenem-resistant other bacteria detected were less than 100 colonies in both wastewater and sludge samples. Since there were no carbapenem-resistant E. coli colonies (Supplementary Table S2), 17 carbapenem-resistant colonies that did not show the characteristic E. coli blue color, but grew on the mTEC agar, were isolated. These bacterial isolates were subsequently identified as P. otitidis (MR1–MR11, MR13–MR18) by 16S rRNA gene sequencing (Table 1). PFGE fingerprinting patterns showed that among the 17 P. otitidis, five isolates were identical to one of the isolates, that is MR3 to MR1, MR5, MR10 to MR4, MR13 to MR11, MR18 to MR16 (Supplementary Figure S1). These identical isolates of P. otitidis were not included in the following blaPOM analysis. MICs of these 17 P. otitidis isolates showed that isolates MR6, MR7, and MR8 showed resistance to meropenem at 8 mg/L. The remaining P. otitidis isolates have MIC of 16 mg/L. PCR and sequencing of blaPOM showed that 12 P. otitidis (MR1, MR2, MR4, MR6, MR7, MR8, MR9, MR11, MR14, MR15, MR16, and MR17) were found to possess a subclass B3 MBL named POM (P. otitidis MBL).

Table 1

Characterization of carbapenem-resistant non-Enterobacteriaceae (n = 17) isolated from wastewater

IsolationSpecies identified (16S rDNA)XbaI-PFGEMICs for meropenem (mg/L)PlasmidsCarbapenem-resistant genes
MR1 Pseudomonas otitidis – 16 97 kb blaPOM 
MR2 Pseudomonas otitidis – 16 – blaPOM 
MR3 Pseudomonas otitidis Same as MR1 16 – NT 
MR4 Pseudomonas otitidis – 16 – blaPOM 
MR5 Pseudomonas otitidis Same as MR4 16 – NT 
MR6 Pseudomonas otitidis – – blaPOM 
MR7 Pseudomonas otitidis – – blaPOM 
MR8 Pseudomonas otitidis – – blaPOM 
MR9 Pseudomonas otitidis – 16 – blaPOM 
MR10 Pseudomonas otitidis Same as MR4 16 – NT 
MR11 Pseudomonas otitidis – 16 – blaPOM 
MR13 Pseudomonas otitidis Same as MR11 16 – NT 
MR14 Pseudomonas otitidis – 16 – blaPOM 
MR15 Pseudomonas otitidis – 16 – blaPOM 
MR16 Pseudomonas otitidis – 16 – blaPOM 
MR17 Pseudomonas otitidis – 16 – blaPOM 
MR18 Pseudomonas otitidis Same as MR16 16 – NT 
IsolationSpecies identified (16S rDNA)XbaI-PFGEMICs for meropenem (mg/L)PlasmidsCarbapenem-resistant genes
MR1 Pseudomonas otitidis – 16 97 kb blaPOM 
MR2 Pseudomonas otitidis – 16 – blaPOM 
MR3 Pseudomonas otitidis Same as MR1 16 – NT 
MR4 Pseudomonas otitidis – 16 – blaPOM 
MR5 Pseudomonas otitidis Same as MR4 16 – NT 
MR6 Pseudomonas otitidis – – blaPOM 
MR7 Pseudomonas otitidis – – blaPOM 
MR8 Pseudomonas otitidis – – blaPOM 
MR9 Pseudomonas otitidis – 16 – blaPOM 
MR10 Pseudomonas otitidis Same as MR4 16 – NT 
MR11 Pseudomonas otitidis – 16 – blaPOM 
MR13 Pseudomonas otitidis Same as MR11 16 – NT 
MR14 Pseudomonas otitidis – 16 – blaPOM 
MR15 Pseudomonas otitidis – 16 – blaPOM 
MR16 Pseudomonas otitidis – 16 – blaPOM 
MR17 Pseudomonas otitidis – 16 – blaPOM 
MR18 Pseudomonas otitidis Same as MR16 16 – NT 

NT, not tested.

Close Modal

or Create an Account

Close Modal
Close Modal